MeTag

<p>Entwicklung von Trenntechniken für die Kopplung mit der Elementmassenspektrometrie</p>

<p>Die quantitative Analyse von Proteinmischungen ist essentiell für das Verständnis von Veränderungen in lebenden Organismen. Zwar sind seit der Einführung von Isotope-coded Affinity Tags (ICAT) wichtige methodische Fortschritte auf diesem Gebiet gemacht worden, allerdings sind alle ICAT- und damit verwandte Methoden nur für eine relative Quantifizierung von zwei oder mehr Zellzuständen nutzbar. Für viele Bereiche ist eine absolute Quantifizierung in niedrigen Konzentrationsbereichen notwendig. Mit der Einführung von MeTags (metal tags) wurde dieses in Kombination mit der extrem empfindlichen Elementmassenspektrometrie erst möglich. Aufgrund der fehlenden Strukturinformation in der Elementmassenspektrometrie ist es aber zwingend nötig hochauflösende Trennverfahren anzuwenden. Nur diese hochauflösenden Trennverfahren ermöglichen eine eindeutige Zuordnung von Gehalt (aus den elementmassenspektrometrischen Messungen) und Struktur (aus den molekülmassenspektrometrischen Messungen). Die HPLC ist aufgrund ihrer hohen Trennleistung eine Paradedisziplin in dieser Hinsicht. Allerdings reicht die Trennleistung dieser Methode immer noch nicht aus, um einzelne Substanzen aus komplexen Mischungen sicher zu identifizieren und zu quantifizieren. Um die Trennleistung der klassischen eindimensionalen HPLC weiter zu erhöhen, besteht die Möglichkeit weitere Trenndimensionen einzuführen. Dieses Verfahren wird seit längerem als MUDPIT (Multidimensional Protein Identification Technique) in der Molekülmassenspektrometrie zur Protein- und Peptididentifizierung angewendet.
Ziel dieses Projektes ist es mehrdimensionale Trenntechniken wie 2D-HPLC mit der Elementmassenspektrometrie zu koppeln, um so sowohl das Auflösungsvermögen, als auch die Nachweis- und Bestimmungsgrenzen der Elementmassenspektrometrie von MeTag-markierten Proteinen und Peptiden zu verbessern. Nach erfolgreicher Umsetzung dieser Kopplung von hochauflösender Trenn- und Nachweistechnik wird das System auf biologisch relevante Fragestellungen angewendet.</p>